Русская Википедия:Искусственная бактериальная хромосома
Искусственная бактериальная хромосома (Шаблон:Lang-en) — векторная система на основе F-плазмиды E. coli, участков cos фага лямбда и loxP фага Р1, используемая для клонирования длинных (150—350[1] тыс. п.н.) последовательностей ДНК[2][3][4]. F-плазмида кодирует гены, регулирующие репликацию и контролирующие копийность (1—2 молекулы на клетку). По участку loxP плазмидная ДНК может быть расщеплена белком Cre фага Р1, по cos-участку — соответствующим ферментом фага лямбда. Схожая векторная система под названием PAC (Шаблон:Lang-en) была сделана на основе бактериальной P1-плазмиды из ДНК фага P1.
Искусственные бактериальные хромосомы часто используются для секвенирования геномов организмов в различных проектах, например в проекте Геном человека. Короткий фрагмент ДНК исследуемого организма вставляется в хромосому, а затем амплифицируется и секвенируется. После этого прочитанные последовательности выравниваются in silico в результате чего получается полная последовательность генома организма. Сейчас такой подход был вытеснен более быстрыми и менее трудоёмкими методами секвенирования, например методом дробовика или методами секвенирования нового поколения.
Генетические компоненты
- repE
- регулирует репликацию и количество копий плазмиды.
- parA и parB
- для распределения ДНК F-плазмиды в дочерние клетки во время деления и стабильного поддержания хромосомы.
- Селективный маркёр
- часто ген устойчивости к антибиотикам; в некоторых также содержится lacZ в месте клонирование гена, что позволяет проводить бело-голубую селекцию.
- T7 и Sp6
- фаговые промоторы для транскрипции вставленных генов.
См. также
Примечания
