Файл:RIKEN reagents.pngОбщая формула клик-реагентов RIKEN: R — метка или функциональная группа
Клик-реагенты RIKEN — ряд реагентов, содержащих фрагмент непредельного альдегида для селективной модификации остатков лизина по реакции электроциклизации.
Реагенты RIKEN мимикрируют под реально существующий биологический процесс, когда непредельный альдегид, являющийся сильным ингибиторомфосфолипазы, селективно реагирует с первичными аминогруппами, в том числе боковыми аминогруппами лизина, и необратимо даёт 1,2-дигидропиридины в качестве конечных продуктов модификации. На первой стадии этого процесса образуется 1-азатриен, который затем медленно циклизуется в 1,2-дигидропиридин. Ускорить процесс электроциклизации позволяет наличие сложноэфирной группы в положении С4 и сопряжённойароматической системы в положении С6. На основе этих открытий и был предложен общий вид клик-реагентов RIKEN для модификации белковШаблон:Sfn.
Остаток глицина, находящийся в реагентах RIKEN, позволяет вводить в них распространённые метки, которые затем будут доставляться в белки. Так, синтезированы реагенты RIKEN, содержащие флуоресцентные метки TAMRA, Cy5, 7-диэтиламинокумарин и другие. Также получен реагент, содержащий хелатор DOTA, который после хелатирования с ионом Gd3+ представляет интерес для ПЭТ-томографии и МРТ. Синтезирован также реагент, содержащий биотинШаблон:Sfn.
Модельные эксперименты проводились на человеческом сывороточном альбумине (ЧСА) с использованием реагента DOTA — альдегид. Его сравнение проводилось с реагентом DOTA — сукцинимидный эфир, также модифицирующим остатки лизина. И тот, и другой реагент модифицировали по несколько остатков лизина, однако альдегидный реагент вступал в реакцию в значительно более низких концентрациях (1 мкМ и даже 100 нМ), тогда как сукцинимидный эфир переставал модифицировать белок уже в концентрации 10 мкМШаблон:Sfn.
Подобным образом, моноклональные антитела в фосфатном буфере удалось модифицировать всего 20 мкМ раствором TAMRA-альдегида, введя два остатка в наиболее доступный Fc-фрагмент, сохранив тем самым 90 % активности антителШаблон:Sfn.
