Русская Википедия:Среда LB
Среда LB (Шаблон:Lang-en) — богатая среда для роста культур бактерий. Аббревиатура LB часто неверно расшифровывается как Luria broth, Lennox broth, или Среда Luria-Bertani. Согласно автору прописи среды, Джузеппе Бертани, сокращение LB означает Шаблон:Lang-en — лизогенная среда.[1] Состав среды LB впервые опубликован в 1951 году в статье Бертани по лизогении. В этой статье описано выделение фагов энтеробактерий P1, P2 и P3 в разработанной им среде для оптимального роста Shigella и образования бляшек фагов.[1][2]
Среда LB стала стандартом для выращивания культур Escherichia coli с 1950-х годов.[3][4][5][6][7] Среду LB широко используют в молекулярной микробиологии для выделения плазмидной ДНК и рекомбинантных белков. Среда остается наиболее часто используемой для выращивания рекомбинантных штаммов Escherichia coli.[8] Использование среды LB для исследований в области физиологии ограничено.[9]
Состав
Описано несколько составов среды LB. Они имеют сходный состав и содержат:
- пептиды и пептоны казеина
- витамины, в том числе витамины группы В
- микроэлементы (азот, сера, магний)
Источником пептидов и пептонов является триптон. Витамины и микроэлементы содержатся в экстракте дрожжей. Ионы натрия, необходимые для транспорта и осмотического баланса, добавляют в состав среды в виде хлорида натрия. Триптон также является источником незаменимых аминокислот.
В оригинальной статье 1951 года Бертани использовал 10 граммов NaCl и 1 грамм глюкозы на 1 литр среды; Лурия в среде «L broth» 1957 года полностью скопировал среду Бертани.[6] Последующие прописи не содержат глюкозу.
Прописи среды LB отличаются количеством добавляемого хлорида натрия, что позволяет создать условия для выращивания разных штаммов бактерий. Среды с низкой концентрацией солей, Lennox LB и Luria LB используют для выращивания культур с соле-чувствительными антибиотиками.[10]
- LB-Miller (10 г/л NaCl)
- LB-Lennox (5 г/л NaCl)
- LB-Luria (0,5 г/л NaCl)
Приготовление
Общий способ приготовления 1 литра сред:
- Взвесить:
- Растворить в 800 мл дистиллированной или деионизованной воды
- Довести до точного объема 1 л в мерном цилиндре.
- Автоклавировать при 121 ° C в течение 20 минут
- После охлаждения перемешать колбу, чтобы перемешать компоненты среды.
pH среды
Перед автоклавированием некоторые исследователи доводят рН среды до 7,5 или 8 раствором гидроксида натрия. Однако гидроксид натрия не обладает какими-то буферными свойствами, поэтому рН среды резко изменяется при размножении бактерий. Для поддержания определенного значения рН некоторые исследователи доводят рН до требуемого 5-10 мМ раствором Трис с заданным pH (хотя использование буфера при такой концентрации не может обеспечить поддержания заданного рН при размножении бактерий). В большинстве случаев точный рН среды не требуется.
Примечания
- ↑ 1,0 1,1 Шаблон:Cite pmid
- ↑ Bertani, G. (1951). Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli. J. Bacteriol. 62:293-300. PMID 14888646 PDF
- ↑ Ошибка цитирования Неверный тег
<ref>; для сносокM72не указан текст - ↑ Ошибка цитирования Неверный тег
<ref>; для сносокL60не указан текст - ↑ Ошибка цитирования Неверный тег
<ref>; для сносокL55не указан текст - ↑ 6,0 6,1 Ошибка цитирования Неверный тег
<ref>; для сносокL57не указан текст - ↑ Ошибка цитирования Неверный тег
<ref>; для сносокA46не указан текст - ↑ Ошибка цитирования Неверный тег
<ref>; для сносокsambrookне указан текст - ↑ Nikaido, H. (2009). The Limitations of LB Medium. Small things considered — The Microbe Blog. ASM. http://schaechter.asmblog.org/schaechter/2009/11/the-limitations-of-lb-medium.html Шаблон:Wayback
- ↑ Шаблон:Книга http://www.exptec.com/Reagents/Common%20Media.htm Шаблон:Wayback
